玻璃層析柱是實驗室中進行柱色譜分離的常用工具，廣泛應用于有機合成、天然產物提取及教學實驗中。為確保分離效果穩定、重現性好，并保障操作安全，制定并遵循一套標準化操作流程(SOP)至關重要。以下是玻璃層析柱從裝柱到洗脫的規范操作步驟：
一、準備工作
選擇合適規格：根據樣品量和分離難度，選擇適當內徑與長度的玻璃層析柱(通常樣品量不超過填料體積的1–2%)。
檢查柱體：確認玻璃柱無裂紋、活塞密封良好、旋塞潤滑順暢。必要時在柱底墊入玻璃棉或燒結板，防止填料泄漏。
準備填料與溶劑：常用填料包括硅膠、氧化鋁或反相C18樹脂；所有溶劑需預先脫氣并用0.45μm濾膜過濾。
二、濕法裝柱(推薦方法)
向柱中加入約1/3體積的初始洗脫劑(如石油醚或正己烷)。
將填料緩慢倒入溶劑中，邊加邊輕敲柱壁以排除氣泡，形成均勻沉降的固定相床層。
打開活塞，讓多余溶劑流出，同時持續補充填料，直至達到所需高度(通常保留1–2 cm頂部空間)。
保持柱床表面平整，避免干裂；始終確保填料上方覆蓋一層溶劑。
三、上樣
將樣品溶解于最小體積的低極性溶劑中(盡量與初始洗脫劑一致)。
用滴管沿柱壁緩慢加入樣品，避免擾動填料表面。
打開活塞，讓樣品剛好滲入填料頂部，再用少量洗脫劑沖洗柱壁，重復2–3次。
四、洗脫與收集
緩慢加入洗脫劑，控制流速(通常1–5 mL/min，視柱徑而定)，可使用恒壓裝置或重力自然流。
根據TLC或UV監測結果，分段收集目標組分。
洗脫過程中避免柱床干涸或產生氣泡，否則將嚴重影響分離效果。
五、結束與清洗
洗脫完成后，排空溶劑，用適當溶劑全部沖洗柱體及填料。
若填料可重復使用，按規范再生；若為一次性使用，則妥善處理廢料。
清洗玻璃柱內外壁，晾干后存放于安全位置。
遵循上述SOP，不僅能提高分離效率和實驗重現性，還能有效延長玻璃層析柱使用壽命，保障實驗人員安全。建議實驗室將此流程納入標準培訓內容，并根據具體實驗需求進行微調。
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